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斑点杂交(dot blot)实验

斑点杂交(dot blot)是一种检测、分析和鉴定DNA、RNA和蛋白质的技术,通过显影斑点的有无及颜色的深浅来判断是否有杂交及其杂交强度。将蛋白样品/DNA样品/RNA样品点到尼龙膜或硝酸纤维素膜(NC)上,通过紫外交联/或者恒热干燥使样品吸附到尼龙膜/NC膜上,再通过探针杂交或者抗体吸附对样品进行定性定量分析。

关键词:

实验

杂交

斑点杂交

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详情描述

斑点杂交(dot blot)实验


一、实验原理

  斑点杂交(dot blot)是一种检测、分析和鉴定DNA、RNA和蛋白质的技术,通过显影斑点的有无及颜色的深浅来判断是否有杂交及其杂交强度。将蛋白样品/DNA样品/RNA样品点到尼龙膜或硝酸纤维素膜(NC)上,通过紫外交联/或者恒热干燥使样品吸附到尼龙膜/NC膜上,再通过探针杂交或者抗体吸附对样品进行定性定量分析。

  

二、实验应用

  1、核酸表观遗传修饰印迹(甲基化/羟甲基化印迹)例如:研究RNA的m6A修饰时经常用到斑点杂交来对细胞内总RNA的m6A修饰水平进行定性或半定量分析搜寻与已知蛋白在细胞内互作的蛋白。

  2、单链DNA/RNA印迹

  3、蛋白质斑点印迹

  

三、实验结果展示

  

四.服务内容及流程 

1.样本制备

2.上样

3.固定

4.交联

5.封闭

6.孵育一抗

7.孵育二抗

8.曝光

 

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