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DNA甲基化实验
关键词：
甲基化
胞嘧啶
所属分类：
详情描述
DNA甲基化实验
一、DNA甲基化介绍
DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase,Dnmts）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达，这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。
二、DNA甲基化检测方法
1、甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。
2、亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶，最后将PCR产物克隆至载体后进行测序，就可以判断CpG位点是否发生甲基化，这种方法称为BSP-克隆测序法。
三．实验结果展示
M:2000maker:2000bp:1000bp:750bp:500bp:250bp:100bp
1:5CA-M
2: 5CA-U
3:12CA-M
4:12CA-U
5:26CA-M
6:26CA-U
BSP：
四、送样运输要求：
动物组织：新鲜的组织量100 mg(黄豆大小)，最少50 mg（绿豆大小），干冰运输。
细胞：1×10^6个细胞，收集细胞沉淀，干冰运输。
全血：最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管，-20度运输。
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