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透射电镜实验

透射电镜(TEM)利用电子束作光源,用电磁场作透镜,经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上,形成明暗不同的影像,是综合物理学和生物学相关领域重要的分析方法。透射电子显微镜相比光学显微镜具有较高分辨率,可达0.2nm,200-200k倍之间连续可调,用于观察样品的内部超微精细结构。

关键词:

实验

透射电镜

电子束

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详情描述

透射电镜实验


  一、概述:

  透射电镜(TEM)利用电子束作光源,用电磁场作透镜,经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上,形成明暗不同的影像,是综合物理学和生物学相关领域重要的分析方法。透射电子显微镜相比光学显微镜具有较高分辨率,可达0.2nm,200-200k倍之间连续可调,用于观察样品的内部超微精细结构。

  

二、实验应用

  TEM在细胞生物学、病毒学、病理学、材料科学等诸多领域具有广泛应用。可以用于观测动物植物细胞超微结构,如线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体、叶绿体、液泡及细胞内生细菌等结构变化。观测病毒颗粒、外泌体、病原微生物、各类细菌真菌、纳米材料及纳米颗粒、晶体结构。

  

三、实验示例

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四、送样运输要求:

  ①、组织样本:

  1.组织固定,体积尽可能小,一般要求1mm3大小,如果容易漂浮的组织样本,在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中,组织太大固定不充分,容易造成照片模糊或者结构溶解。

  2.组织取材要迅速干脆,在几分钟内保存于戊二醛,保持结构完整性。

  3.组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验,不要存放太长时间。

  4.部分组织需要在电镜时定位,需要加收定位费,常规组织定位如:肾脏观察肾小球变化,肺组织观察特殊的细胞结构,脑组织定位CA1、CA2、CA3结构等。

  ②、细胞样本:

  样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验,一般要求细胞量10^6以上。

  贴壁细胞:

  弃去培养基,PBS洗涤3次,每孔加入1ml 2.5%戊二醛固定1-1.5h,固定完毕后,细胞刮轻柔的将细胞刮下,收集至1.5mL离心管内,取5ul在显微镜下观察细胞是否刮碎,如果细胞完整,则1000rpm离心5min收集细胞,加入1ml新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4度避光保存,一般保存1周进行实验。

  悬浮细胞:细胞离心收集后,加1ml 2.5%戊二醛混匀固定,4度避光保存。

  ③、微泡&外泌体:

  客户需要将微泡&外泌体分离出来,2.5%戊二醛重悬固定,2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可,保证微泡&外泌体的浓度便于观察寻找。

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